支原體污染檢測技術(shù)服務(wù)

技術(shù)簡介

支原體，直徑在0.1-0.3微米，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡單的原核生物，可以輕松地通過濾膜，混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，呈高度多形性形態(tài)。支原體是實驗室中常見的污染細胞的原核生物，能夠抑制細胞代謝和生長，改變核酸合成，影響細胞抗原性，導致染色體改變等。因此每一株外來細胞都應(yīng)進行支原體檢測，并且應(yīng)對培養(yǎng)中的細胞進行定期支原體檢測。本實驗室采用PCR檢測法鑒定支原體污染現(xiàn)象，并用專門的試劑進行清除。

為什么要做支原體污染清除與檢測

當實驗室建立新的細胞系，細胞功能不正常，文章發(fā)表，國外期刊雜志要求，細胞凍存之前或?qū)嶒炇壹毎Ｒ?guī)定期檢測時，需要進行支原體污染檢測。從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養(yǎng)都要進行支原體檢測。以細胞為載體的科學研究，如果不能保證所用的細胞無支原體污染，則實驗結(jié)果很可能是極端不可靠甚至是完全錯誤的。

支原體具有變形能力，可透過常見過濾膜(0.22-0.45 μm)，因此常規(guī)的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體污染是細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個世界性問題，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。支原體可通過細胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不會引起培養(yǎng)物混濁，因此細胞被支原體污染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響細胞生長速率，促進代謝物積累，改變細胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細胞因子表達，改變被污染細胞的基因表達譜，誘導染色體畸變。