胃癌作為全球高發(fā)的惡性腫瘤之一，其復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制和高度異質(zhì)性為臨床治療帶來(lái)巨大挑戰(zhàn)。構(gòu)建人胃癌細(xì)胞成瘤模型，是突破傳統(tǒng)體外研究局限、模擬真實(shí)腫瘤微環(huán)境的關(guān)鍵技術(shù)手段。該模型不僅能精準(zhǔn)再現(xiàn)胃癌細(xì)胞在體內(nèi)的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移特性，還可用于評(píng)估靶向藥物療效、解析耐藥機(jī)制及探索免疫治療新策略，為轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究提供"活體實(shí)驗(yàn)室"。通過(guò)這一模型，我們得以在分子、細(xì)胞和整體水平上系統(tǒng)解析胃癌進(jìn)展規(guī)律，加速?gòu)幕A(chǔ)研究到臨床應(yīng)用的轉(zhuǎn)化步伐，為個(gè)體化精準(zhǔn)治療方案的制定奠定科學(xué)基石。

細(xì)胞簡(jiǎn)介

細(xì)胞名稱(chēng)：MKN45-FLuc-puro(人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記)

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：胃

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景介紹：Luciferase MKN45細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲(chóng)熒光素酶?？捎米魑灮鹣x(chóng)熒光素酶活性檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株是由S·Akiyama建立，源于一位35歲患有印戒細(xì)胞癌的女性的胃淋巴結(jié)。

puro藥篩濃度：MKN45-Luc細(xì)胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml，培養(yǎng)過(guò)程中建議使用0.5ug/ml濃度puro維持

培養(yǎng)須知：MKN45-Luc細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中容易成團(tuán)，消化時(shí)間需要控制好，不能吹打過(guò)猛，吹打過(guò)猛容易產(chǎn)生細(xì)胞碎片，導(dǎo)致皿底變臟。消化用的胰酶放到常溫再加，要浸沒(méi)過(guò)細(xì)胞，加完放培養(yǎng)箱至少五分鐘，到用胰酶能輕松吹下來(lái)。要細(xì)胞吹下來(lái)再終止消化。培養(yǎng)基要保持充足。

MKN45親本株及衍生細(xì)胞系在小鼠體內(nèi)成瘤案例(僅供參考)

MKN45親本株及衍生細(xì)胞系成瘤模型特點(diǎn)總結(jié)

1.成瘤時(shí)間：通常接種后 2-4 周 即可形成可見(jiàn)腫瘤，具體時(shí)間與接種部位(皮下或原位)及細(xì)胞數(shù)量相關(guān)。

下列實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)僅供參考：

皮下成瘤：

腫瘤體積：接種后14天達(dá)200-300 mm3，21天達(dá)800-1000 mm3。

基質(zhì)膠優(yōu)化：添加50%基質(zhì)膠(Corning #356237)可提高成瘤率至100%。

原位移植：

熒光標(biāo)記(MKN45-Luc)：活體成像(IVIS)顯示肝轉(zhuǎn)移信號(hào)強(qiáng)度在28天達(dá)1×108 p/s/cm2/sr。

病理驗(yàn)證：HE染色確認(rèn)肝組織中轉(zhuǎn)移灶，免疫組化顯示VEGF、MMP9高表達(dá)。

高轉(zhuǎn)移亞系(MKN45sci)：

篩選方法：通過(guò)反復(fù)體內(nèi)傳代篩選出高侵襲亞系，肺轉(zhuǎn)移能力提升至60%。

2.腫瘤生長(zhǎng)特性：

快速增殖：皮下接種后腫瘤體積可在 4 周內(nèi)達(dá)到 500-1000 mm3。

侵襲性及轉(zhuǎn)移性：原位接種模型顯示MKN45 腫瘤可向肝、肺等器官轉(zhuǎn)移，模擬胃癌臨床進(jìn)展。

3.應(yīng)用領(lǐng)域：

藥物療效評(píng)估：常用于化療藥物(如紫杉醇、氟尿嘧啶)及靶向治療(如 HER2 抑制劑)的體內(nèi)驗(yàn)證。

不同胃癌細(xì)胞株成瘤能力對(duì)比(僅供參考)

MKN45-Fluc-puro細(xì)胞成瘤影響因素及優(yōu)化策略

小鼠品系：

BALB/c-nu(T細(xì)胞缺陷)成瘤率高于NOD/SCID(B/T/NK細(xì)胞聯(lián)合缺陷)，但后者更適合免疫治療研究。

細(xì)胞活力：

細(xì)胞活力需>95%(臺(tái)盼藍(lán)染色驗(yàn)證)，活力低于80%時(shí)成瘤率降至60%以下。

基質(zhì)膠使用：

濃度：推薦8-10 mg/ml，低于6 mg/ml時(shí)成瘤率下降20%。

混合比例：細(xì)胞懸液與基質(zhì)膠1:1混合，冰上操作防止凝固。

常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案

基于MKN45-FLuc-puro細(xì)胞成瘤模型的代表性藥物研究(僅供參考)

MKN45-Fluc-puro細(xì)胞成瘤實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)建議

模型選擇：

肝轉(zhuǎn)移研究：優(yōu)先使用原位移植模型(高肝轉(zhuǎn)移率)。

肺轉(zhuǎn)移快速篩選：選擇尾靜脈注射模型(周期短)。

藥物評(píng)價(jià)指標(biāo)：定量標(biāo)準(zhǔn)：轉(zhuǎn)移灶數(shù)量、IVIS信號(hào)強(qiáng)度、生存期延長(zhǎng)率。

分子機(jī)制：通過(guò)Western blot檢測(cè)EMT標(biāo)志物(E-cadherin↓, Vimentin↑)。