常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
發(fā)布時間：2025-04-25 08:56:09 細(xì)胞資源庫平臺 訪問量：45
人胰腺癌是一種高度惡性的消化道腫瘤，其中胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)占90%以上，因其早期癥狀隱匿、侵襲性強(qiáng)、易發(fā)生轉(zhuǎn)移及治療抵抗性而被稱為“癌中之王”。全球范圍內(nèi)，胰腺癌的五年生存率不足10%，其高死亡率與腫瘤復(fù)雜的微環(huán)境(如致密間質(zhì)增生、免疫抑制及代謝異常)密切相關(guān)，導(dǎo)致傳統(tǒng)治療手段(手術(shù)、化療等)效果有限。構(gòu)建胰腺癌成瘤模型(如基因工程小鼠模型、患者來源異種移植模型或3D類器官模型)對深入解析其發(fā)病機(jī)制、篩選有效治療靶點及評估藥物療效至關(guān)重要。這些模型能夠模擬腫瘤異質(zhì)性、微環(huán)境互作及治療抵抗特征，為開發(fā)靶向治療、免疫治療及個體化精準(zhǔn)策略提供可靠平臺，最終推動基礎(chǔ)研究向臨床轉(zhuǎn)化的突破。
細(xì)胞名稱：HPAC-NLuc-puro人胰腺腺泡上皮癌(NLUC標(biāo)記)
種屬來源：人
組織來源：胰腺
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景介紹：Luciferase HPAC細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加抗生素維持。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株是由一名(患有中分化至高分化導(dǎo)管源性胰腺癌)女性患者的原發(fā)性腫瘤裸鼠異種移植物中分離。
puro藥篩濃度：HPAC-NLuc-puro細(xì)胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml puro維持
培養(yǎng)須知：首次復(fù)蘇或長期未用嘌呤霉素時，建議用含嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48小時以清除非抗性細(xì)胞。建議定期備份低代次細(xì)胞，并記錄熒光素酶活性數(shù)據(jù)以確保實驗一致性。如有特殊需求(如無血清培養(yǎng))，需逐步馴化并驗證基因穩(wěn)定性。雙標(biāo)記(NLuc+Puro)確保長期基因穩(wěn)定性，但需持續(xù)篩選壓力。
| 接種方法 | 模型類型 | 小鼠品系 | 成瘤率 | 成瘤時間 | 腫瘤特性 | 轉(zhuǎn)移傾向 | 檢測方法 |
| 皮下注射(2×10?細(xì)胞，Matrigel輔助) | 異種移植 | BALB/c裸鼠 | 95% (19/20) | 3-4周 | 表達(dá)NLuc，可實時監(jiān)測腫瘤生長動態(tài) | 局部侵襲，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 | 生物發(fā)光成像+組織病理 |
| 原位注射(1×10?細(xì)胞，NLUC標(biāo)記) | 原位模型 | NSG小鼠 | 85% (17/20) | 4-5周 | 高分化腺癌，強(qiáng)熒光素酶信號 | 肝轉(zhuǎn)移(25%)，腹膜播散 | 活體成像(IVIS) |
| 尾靜脈注射(5×10?細(xì)胞) | 轉(zhuǎn)移模型 | NOD/SCID | 60% (6/10) | 2-3周 | 肺和肝微轉(zhuǎn)移灶，NLuc信號追蹤 | 多器官微轉(zhuǎn)移(肺/肝) | 活體成像+免疫組化 |
| 產(chǎn)品貨號 | 細(xì)胞系 | 成瘤率 | 成瘤時間 | 轉(zhuǎn)移傾向 | 應(yīng)用場景 |
| IM-H157 | HPAC | +++ | 3-5周 | 低至中度(肝/淋巴結(jié)) | 高分化，保留胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)志物(CK19+) |
| IML-164 | HPAC-NLuc-puro | +++ | 3-5周 | 中度(肝/腹膜/肺) | NLUC標(biāo)記支持活體成像，適合縱向轉(zhuǎn)移追蹤 |
| IM-H160 | PANC-1 | ++ | 6-8周 | 極低(局部侵襲) | 低分化，KRAS突變，耐化療 |
| IM-H159 | MIA PaCa-2 | +++ | 2-3周 | 無 | 低分化，缺乏黏液分泌 |
| IM-H165 | BxPC-3 | ++ | 8-10周 | 無 | KRAS野生型，對EGFR抑制劑敏感 |
| IM-H340 | AsPC-1 | +++ | 4-5周 | 高(腹膜/肝轉(zhuǎn)移) | 高侵襲性，EMT表型顯著 |
| IM-H154 | Capan-1 | + | 10-12周 | 低 | 高分化，保留黏蛋白分泌能力 |
| 類別 | 具體因素 | 影響說明 | 優(yōu)化策略 |
| 細(xì)胞活力與預(yù)處理 | 復(fù)蘇后細(xì)胞活性低，增殖能力下降 | 凍存/復(fù)蘇損傷導(dǎo)致凋亡增加，NLuc信號減弱 | -優(yōu)化凍存液配方(含10% DMSO+90% FBS) - 復(fù)蘇后預(yù)培養(yǎng)至對數(shù)生長期(≥3代) |
| 宿主免疫狀態(tài) | 免疫排斥(殘留T/NK細(xì)胞活性) | 小鼠品系免疫缺陷不徹底，清除異種移植細(xì)胞 | - 使用重度免疫缺陷小鼠(如NSG或NOG) - 接種前小鼠輻照(1-2 Gy)降低殘留免疫 |
| 細(xì)胞接種數(shù)量 | 原位或皮下成瘤效率不穩(wěn)定 | 細(xì)胞數(shù)過低(<1×10?)導(dǎo)致成瘤延遲，過高(>5×10?)引發(fā)局部壞死 | - 原位接種推薦1-2×10?細(xì)胞(含Matrigel) - 皮下接種2-3×10?細(xì)胞 |
| 標(biāo)記基因穩(wěn)定性 | 長期傳代后NLuc/puro抗性丟失 | 基因沉默或質(zhì)粒丟失(尤其未使用抗生素維持) | - 定期用嘌呤霉素(1-2 μg/mL)篩選 - 凍存低代細(xì)胞(≤10代)避免基因漂變 |
| 問題 | 原因 | 解決方案 |
| 細(xì)胞污染(細(xì)菌/真菌/支原體) | 無菌操作不規(guī)范或培養(yǎng)基污染 | 嚴(yán)格無菌操作，定期檢測支原體;丟棄污染細(xì)胞，更換新批次培養(yǎng)基。 |
| 細(xì)胞狀態(tài)差，增殖緩慢 | 培養(yǎng)基成分不當(dāng)、傳代過度或細(xì)胞老化 | 優(yōu)化培養(yǎng)基(如添加特定生長因子)，控制傳代次數(shù)(<20代)，使用新鮮解凍細(xì)胞。 |
| 注射后無法形成腫瘤 | 細(xì)胞活性低、注射量不足或免疫缺陷小鼠品系不符 | 確保細(xì)胞活性>90%，調(diào)整注射量(通常1×10?~5×10?/小鼠)，使用NOD/SCID等重度免疫缺陷鼠。 |
| 成瘤速度差異大 | 注射部位不均勻(皮下/原位)、細(xì)胞懸液溫度不當(dāng) | 統(tǒng)一注射部位(如右腋下)，保持細(xì)胞懸液在冰上操作，避免長時間室溫暴露。 |
| 活體成像信號弱或不穩(wěn)定 | 熒光素底物(furimazine)劑量不足或成像時間不當(dāng) | 優(yōu)化底物注射量,注射后1-5分鐘成像，避免麻醉過深影響代謝 |
| 背景信號干擾 | 小鼠自發(fā)熒光(如食物殘留)或儀器參數(shù)設(shè)置錯誤 | 成像前禁食6小時，調(diào)整儀器曝光時間/光圈，設(shè)置陰性對照組校準(zhǔn)背景。 |
| 實驗組 | 處理方式 | 檢測指標(biāo) |
| 對照組 | 注射 HPAC-NLuc-puro 細(xì)胞 + PBS 或溶劑對照。 | 基礎(chǔ)腫瘤生長曲線、生物發(fā)光基線值。 |
| 藥物治療組 | 注射細(xì)胞后給予靶向藥物(如吉西他濱、PD-1 抑制劑)。 | 腫瘤體積抑制率、生物發(fā)光信號衰減、生存期延長。 |
| 基因干預(yù)組 | 使用 CRISPR/shRNA 敲除特定基因(如 KRAS)的 HPAC-NLuc-puro 細(xì)胞進(jìn)行成瘤實驗。 | 基因功能與腫瘤生長的相關(guān)性分析(如轉(zhuǎn)移能力變化)。 |
常見細(xì)胞污染類型如何辨別及預(yù)防解決方法:細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染,支原體污染,原蟲污染,黑膠蟲污染,真菌污染,病毒污染以及非細(xì)胞污染,真菌污染來源,一般是來自實驗服,并且具有氣候性,多雨······
細(xì)胞聚團(tuán)的原因分析及如何避免:培養(yǎng)物中細(xì)胞可能聚集的一些原因包括:1.過度消化、2.環(huán)境壓力、3.組織分解、4.過度生長、5.污染等;如何避免聚團(tuán)細(xì)胞的生成;首先確認(rèn)當(dāng)前細(xì)胞生長密度及狀態(tài),80%左右的生長密度即可進(jìn)行······
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產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6
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