4T1-FLuc-puro小鼠乳腺癌細胞成瘤驗證

發(fā)布時間：2025-05-06 09:58:20 細胞資源庫平臺訪問量：68

乳腺癌細胞是乳腺上皮細胞在基因突變、表觀遺傳改變及微環(huán)境失衡等多因素作用下形成的惡性轉(zhuǎn)化細胞，具有高度異質(zhì)性，可依據(jù)分子標志物(如ER、PR、HER2及Ki-67)分為不同亞型。其顯著特征包括增殖失控、代謝重編程、免疫逃逸及轉(zhuǎn)移傾向，其中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)和腫瘤干細胞特性是導(dǎo)致復(fù)發(fā)耐藥的關(guān)鍵機制。構(gòu)建乳腺癌成瘤模型(如細胞系異種移植模型、患者來源異種移植模型PDX、類器官及基因工程小鼠模型)對揭示腫瘤發(fā)生發(fā)展機制至關(guān)重要。這些模型可模擬腫瘤微環(huán)境互作、評估靶向藥物敏感性、探索耐藥機制及免疫治療策略，并為個體化治療方案篩選和新藥臨床前評價提供標準化平臺，是銜接基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的重要橋梁。

細胞簡介

細胞名稱：4T1-FLuc-puro小鼠乳腺癌細胞(FLUC標記)

種屬來源：小鼠

組織來源：乳房

生長特性：貼壁生長

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

背景介紹：Luciferase 4T1細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶。可用作螢火蟲熒光素酶活性檢測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。其親本株4T1細胞是從410.4瘤株中未經(jīng)誘變篩得的6-硫鳥嘌噙抗性細胞株。當(dāng)4T1細胞注射到BALB/c小鼠中時，4T1細胞會自發(fā)產(chǎn)生高轉(zhuǎn)移腫瘤，可轉(zhuǎn)移到肺、肝、淋巴結(jié)和大腦，同時在注射部位形成始發(fā)灶，誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移時不需要摘除始發(fā)灶。4T1細胞在BALB/c小鼠中的生長與轉(zhuǎn)移特性與人體中的乳腺癌十分相近，這種腫瘤是人Ⅵ期乳腺癌的動物模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤在手術(shù)后及未手術(shù)情況下轉(zhuǎn)移的動力學(xué)相近，可以用作手術(shù)后及未手術(shù)模型。4T1細胞誘導(dǎo)的腫瘤模型跟其他腫瘤模型相比，由于4T1細胞的抗6-硫鳥嘌噙特性，微小的轉(zhuǎn)移細胞團(少到僅僅1個)也可以在許多遠端器官中檢測到，沒必要數(shù)淋巴結(jié)或稱重器官。

puro藥篩濃度：4T1-FLuc-puro細胞puro藥篩濃度為1.0ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.5ug/ml puro維持

培養(yǎng)須知：首次復(fù)蘇或長期未用嘌呤霉素時，建議用含嘌呤霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)24-48小時以清除非抗性細胞。建議定期備份低代次細胞，并記錄熒光素酶活性數(shù)據(jù)以確保實驗一致性。如有特殊需求(如無血清培養(yǎng))，需逐步馴化并驗證基因穩(wěn)定性。雙標記(FLuc+Puro)確保長期基因穩(wěn)定性，但需持續(xù)篩選壓力。

4T1-FLuc-puro細胞系不同接種方式成瘤特性(僅供參考)

接種方式	接種量(細胞數(shù))	成瘤時間(天)	轉(zhuǎn)移傾向	適用研究方向	優(yōu)缺點
乳腺脂肪墊原味接種	1×10? - 1×10?	5-7天可觸診腫瘤	高(肺、肝、骨轉(zhuǎn)移;21天>80%)	轉(zhuǎn)移機制、腫瘤微環(huán)境、免疫治療研究	優(yōu)點：模擬原位微環(huán)境，轉(zhuǎn)移真實性強; 缺點：需手術(shù)操作，技術(shù)要求高
皮下接種	1×10? - 5×106	7-10天形成可見瘤塊	低(局部生長為主，罕見遠處轉(zhuǎn)移)	藥物療效評估、原位腫瘤生長動力學(xué)研究	優(yōu)點：操作簡單，便于監(jiān)測體積; 缺點：轉(zhuǎn)移率低，微環(huán)境差異大
尾靜脈注射	2×10? - 5×10?	不形成原發(fā)瘤	快速肺轉(zhuǎn)移(7-14天肺轉(zhuǎn)移灶形成)	血行轉(zhuǎn)移機制、抗轉(zhuǎn)移藥物篩選	優(yōu)點：直接研究轉(zhuǎn)移過程; 缺點：無法觀察原發(fā)瘤進展
脛骨原位接種	1×10?	10-14天骨破壞明顯	局部骨轉(zhuǎn)移(伴破骨細胞活化)	乳腺癌骨轉(zhuǎn)移模型、骨靶向治療研究	優(yōu)點：模擬骨轉(zhuǎn)移特異性病理; 缺點：需影像學(xué)監(jiān)測，成本高
腹腔注射	5×10? - 1×10?	不形成實體瘤	腹腔播散(肝、腹膜轉(zhuǎn)移為主)	腫瘤腹水模型、全身性藥物分布研究	優(yōu)點：適合研究播散性轉(zhuǎn)移; 缺點：無法定量評估原發(fā)灶

注意事項

小鼠品系：4T1-FLuc-puro需接種于免疫健全的BALB/c小鼠(同源模型)。

監(jiān)測方法：熒光素酶活性檢測：腹腔注射D-熒光素(150 mg/kg)，通過IVIS成像定量信號強度。

倫理規(guī)范：腫瘤體積需符合動物福利上限(通?！?000 mm3)。

小鼠乳腺癌細胞系成瘤特性差異對比(僅供參考)

產(chǎn)品貨號	細胞系	接種量(細胞數(shù))	成瘤時間(天)	成瘤率	轉(zhuǎn)移傾向	激素受體表達	適用研究方向
IM-M017	4T1	1×10⁴ - 1×10⁶	5-7	>95%	高(肺、肝、骨)	ER-/PR-/HER2-	轉(zhuǎn)移機制、免疫治療、耐藥性研究
IM-M059	EMT6	5×10⁵	10-14	80%-90%	低(局部侵襲)	ER-/PR-/HER2-	放射治療、化療敏感性評估
IM-M099	E0771	2×10⁵	7-10	85%-95%	中等(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)	ER+/PR+	激素依賴性腫瘤、內(nèi)分泌治療研究
IM-M123	67NR	1×10⁵	7-10	>90%	無	ER-/PR-	原位腫瘤生長、血管生成研究
IML-021	4T1-FLUC-puro	1×10⁴ - 1×10⁶	5-7	>90%	高(肺轉(zhuǎn)移為主)	ER-/PR-/HER2-	活體成像、藥物動力學(xué)動態(tài)監(jiān)測

4T1-FLuc-puro細胞成瘤關(guān)鍵影響因素

影響因素	具體說明
細胞活性與狀態(tài)	細胞傳代次數(shù)過高(>20代)或凍存復(fù)蘇不當(dāng)(活性<80%)會導(dǎo)致成瘤延遲或失敗
接種細胞數(shù)量	接種量過低(<1×10?)成瘤率下降;過高可能引發(fā)壞死或免疫排斥
接種部位與操作	乳腺脂肪墊原位接種需精準定位，皮下接種過淺易導(dǎo)致細胞滲漏
小鼠品系與免疫狀態(tài)	需使用BALB/c(同源模型)，免疫缺陷鼠(如NOD/SCID)可能改變轉(zhuǎn)移模式
熒光素酶表達穩(wěn)定性	長期傳代或未加抗生素(Puromycin)維持篩選可能導(dǎo)致熒光素酶信號衰減
實驗環(huán)境與監(jiān)測	溫度波動、營養(yǎng)不良或應(yīng)激(如頻繁抓取)可能抑制腫瘤生長

4T1-FLuc-puro成瘤優(yōu)化策略

優(yōu)化方向	具體策略	預(yù)期效果
細胞預(yù)處理	- 使用低傳代數(shù)細胞(<15代)，復(fù)蘇后培養(yǎng)48小時再接種 - 接種前檢測細胞活性(>90%)及熒光素酶活性	提高成瘤率及信號一致性
接種技術(shù)優(yōu)化	- 乳腺脂肪墊接種：麻醉后經(jīng)第四對乳頭旁切口注射，避免損傷血管 - 皮下接種：使用高粘度基質(zhì)(如Matrigel)減少滲漏	提升原位成瘤效率，減少操作誤差
小鼠管理	- 選擇8-10周齡雌性BALB/c小鼠，避免激素周期干擾 - 提供高脂飼料(含10%脂肪)促進腫瘤血管生成	縮短成瘤時間，增強轉(zhuǎn)移傾向
熒光素酶維持	- 定期用Puromycin(1-2 μg/mL)壓力篩選，防止標記基因丟失 - 活體成像前禁食6小時降低背景噪聲	確保信號穩(wěn)定性，提高成像信噪比
實驗條件控制	- 保持恒溫(22-24℃)、濕度(40-60%)及12小時光照周期 - 減少人為干擾(如固定監(jiān)測時間及操作人員)	降低環(huán)境應(yīng)激對腫瘤生長的干擾

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